题 专题 3
植物的组织培养技术 第 第 9 课时
菊花的组织培养 目标导航 1.了解植物组织培养技术在生产中的应用和 MS 固体培养基的配方。2.熟悉植物组织培养的基本过程和影响植物组织培养的因素。3.理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化。
一、基础知识 1．植物组织培养的基本过程 (1)细胞全能性的表达：________的植物组织或细胞，在一定的____________、________和________________的作用下，发育成完整植株的过程。
(2)细胞分化：在植物的________过程中，细胞在________、________和____________上都会出现________的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。
(3)植物组织培养的基本过程 离体植物器官、组织或细胞(又叫_____)――→
愈伤组织――→
胚状体、丛芽等――→ 生长 新个体 ①愈伤组织的特点：细胞_____________，是一群________的呈_______________的薄壁细胞。
②脱分化(去分化)：由____________的植物组织或细胞产生____________的过程。
③再分化：由________________________重新分化成根或芽等器官的过程。
(4)条件：________的植物组织或细胞，在一定的________、________和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做________。
2．影响植物组织培养的因素 (1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度____________。对于同一种植物材料，材料的________、________________等也会影响实验结果。因此菊花的组织培养，一般选择________________的茎________部________的侧枝。
(2)营养物质的影响：常用的________培养基，主要成分包括____________、____________、________以及蔗糖等。其中____________和____________提供植物细胞所必需的无机盐；________提供碳源，维持细胞渗透压。
(3)植物激素的影响：MS 培养基常需添加植物激素。其中________和____________是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的________、________________以及____________等，都会影响实验结果。
(4)环境因素的影响：________、________、________等条件也能影响植物组织培养。
下表是关于两种植物激素在组织培养过程中的作用。
使用顺序或用量比 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于__________，但细胞________ 先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞____________ 同时使用 分化频率____ 生长素用量/细胞分裂素用量，比值高 有利于____的分化、抑制____的形成 生长素用量/细胞分裂素用量，比值低 有利于____的分化、抑制____的形成 生长素用量/细胞分裂素用量，比值适中 促进________的形成 二、植物组织培养的操作流程 1．制备 MS 固体培养基：将各种营养成分按比例配制成________________。利用母液配制菊花组织培养所需要的培养基，菊花的组织培养比较容易，因此可以不加激素，而如果是其他植物的组织培养，则要配制成三种培养基，即____________、________________和________________。配制菊花的组织培养的培养基时先将称好的琼脂加入 800 mL 蒸馏水中，加热使________熔化；然后加入______________30 g，加入一定量的________，充分混匀后加蒸馏水定容至 1 000 mL，调节________；最后分装到锥形瓶中，每瓶分装 50 mL 或100 mL。用包在纱布中的棉塞封严瓶口，外面包一层牛皮纸。将配制好的培养基放入________________锅，在 121℃下灭菌 15
min。
2．外植物体消毒：选取生长旺盛的菊花的嫩枝，先用清水洗净，再用体积分数为_____________浸泡 6～7 s 后，立即取出并用无菌水清洗，取出后吸干水分再放入质量分数为______________中浸泡 1～2
min。取出后，在无菌水中至少清洗 3 次，漂净消毒液。
3．接种：在超净工作台上铺上无菌滤纸，将已消毒的菊花茎段切成小段(长 0.5～1.0 cm)，迅速接种到培养基上。插入时应注意方向，使嫩茎的形态学下端接触培养基，不要________。每瓶接种 6～8 块嫩茎。接种后，将锥形瓶的瓶口在酒精灯火焰上转动灼烧一遍，将封口膜重新扎好，贴上标签，做好记录。
4．培养：接种后的锥形瓶放在__________中培养。培养温度应控制在 18～22℃，并且每日用日光灯光照 12 h，并定期进行________，保持适宜的________和________。
5．移栽：当小苗长到 5～6 cm，基部形成根原基的时候，即可进行移栽。试管苗是在无菌、充分营养供给、适宜的光照和温度以及 100%相对湿度环境中生长的。刚出瓶的试管苗对外界环境不太适应。将试管苗培养瓶的瓶口敞开一半，放置在 20～25℃的遮阴环境中，适应 7～14 d。若试管苗不萎蔫、有新生长的趋势，便可将试管苗取出，小心洗净粘在根上的培养基，植入盛有________________________等材料的花盆中，浇足水分，罩上带孔的塑料薄膜，将花盆放置在 20～25℃的阴凉处 3～5 d。待幼苗长出新叶时，揭去塑料薄膜，再过 7～10 d，幼苗即可移栽到土壤里。
6．栽培：将幼苗移载后，每天观察并记录幼菌生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
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